O gene CYP2C19 apresenta polimorfismo genético, com impacto importante na farmacocinética de diversos fármacos de importância clínica. O objetivo deste estudo foi avaliar a correlação entre genótipo e fenótipo de CYP2C19 em um grupo de 38 voluntários brasileiros, avaliando a capacidade de predição do fenótipo a partir de testes de genotipagem. Para a fenotipagem, utilizou-se omeprazol (OME) como fármaco-sonda para CYP2C19, empregando sua razão metabólica de hidroxilação como indicador fenotípico. Amostras de sangue foram coletadas antes e três horas após a administração oral de 20mg do fármaco. As concentrações plasmáticas de OME e seu metabólito foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência. A genotipagem de CYP2C19 foi realizada através de ensaio baseado na reação em cadeia da polimerase em tempo real, identificando os alelos *1 (completamente funcional),*2 e *3 (nulos). Pela fenotipagem foi possível estimar a presença de 3 metabolizadores lentos, 34 rápidos e 1 ultra-rápido; enquanto pela genotipagem foi determinada a presença de 4 metabolizadores lentos, 23 rápidos e 11 intermediários. Os grupos de voluntários classificados de acordo com o número de alelos ativos apresentaram diferenças significativas entre as razões metabólicas de hidroxilação de omeprazol. Entretanto, indivíduos com o mesmo genótipo apresentaram fenótipos diferentes. Desta forma, a fenotipagem apresenta-se como alternativa mais promissora para a individualização das doses de fármacos substratos de CYP2C19.

The CYP2C19 gene presents polymorphism affecting the pharmacokinetics of several drugs of clinical importance. The purpose of this study was to investigate the correlation between CYP2C19 genotype and metabolic phenotype in a group of 38 Brazilian volunteers, evaluating the phenotype prediction capacity of the genotyping procedure. For CYP2C19 phenotyping, omeprazole was used as the probe drug, using the hydroxylation metabolic ratio as the phenotypic indicator. Venous blood samples were drawn before and three hours after an oral administration of 20 mg omeprazole. The plasma concentrations of omeprazole and hydroxy-omeprazole were determined by high performance liquid chromatography. The genotyping assay was carried out using a Real-Time-PCR-based assay, identifying the alleles *1 (completely functional), *2, *3 and *4 (null). The phenotyping procedure estimated the presence of 4 poor, 34 extensive and 1 ultra-extensive metabolizer. The genotyping identified 4 poor, 23 extensive and 11 intensive metabolizers. The groups of volunteers classified according to the number of active alleles of CYP2C19 had significant differences in the metabolic ratios of omeprazole hydroxylation. However, volunteers exhibiting the same number of active alleles presented different phenotypes. Therefore, the phenotyping of CYP2C19 is a more promising alternative to dose individualization of CYP2C19 substrate drugs.

Foi desenvolvido e validado um método simples e rápido, empregando CLAE-DAD, para a determinação simultânea de amitriptilina, nortriptilina, E-10-hidroxiamitriptilina, Z-10-hidroxiamitriptilina, E-10-hidroxinortriptilina, Z-10-hidroxinortriptilina e desmetilnortriptilina em amostras de plasma humano. O método utiliza extração líquido-líquido em duas etapas e separação isocrática em fase reversa. A precisão apresentou D.P.R. % menor que 12.1% e a precisão esteve na faixa entre 93,1 e 102,5%. O limite de detecção foi 5 ng mL-1 para todos os analitos. Foram avaliadas razões metabólicas de desmetilação da amitriptilina em indivíduos genotipados para CYP2C19, com nítidas diferenças entre os valores obtidos nos voluntários com zero ou dois alelos ativos. O método é adequado para o monitoramento terapêutico de pacientes em terapia com amitriptilina, permitindo também a indicação da atividade de CYP2C19.

A simple and sensitive HPLC-DAD method for the simultaneous determination of amitriptyline, nortriptyline, E-10-hydroxyamitriptyline, Z-10-hydroxyamitriptyline, E-10-hydroxynortriptyline, Z-10-hydroxynortriptyline and desmethylnortriptyline in human plasma samples was developed and validated. The method employs a two step liquid-liquid extraction and a reversed phase separation with isocratic elution. Precision assays showed R.S.D % lower than 12.1% and accuracy was in the range of 93.1 to 102.5%. Lowest Limit of detection was 5 ng mL-1 for all analytes. Metabolic ratios of amitriptyline demethylation were evaluated in individuals genotyped for CYP2C19, with clear differences between volunteers with zero or two active alleles. The method is suitable for therapeutic drug monitoring of patients under amitriptyline treatment, also allowing the indication of CYP2C19 activity.

Foi desenvolvido um método simples para a determinação simultânea de omeprazol (OME), 5-hidroxiomeprazol (HOME) e omeprazol sulfona (OMES) por meio de CLAE-DAD, utilizando coluna de fase reversa e eluição isocrática. O método proposto avaliou polimorfismos genéticos de CYP2C19 e CYP3A4 utilizando omeprazol como fármaco sonda em um grupo de voluntários brasileiros. OME, HOME e OMES foram extraídos de amostras de plasma com tampão Tris pH 9,5 (0,2 mol L-1) e acetato de etila. A separação por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) foi realizada com uma coluna Shim-Pack RP-18e (150 <FONT FACE=Symbol>´</FONT> 4,6 mm d.i., 5 µm), com acetonitrila-tampão fosfato pH 7,6 (24:76, v/v) como fase móvel e tempo total da corrida de 15 min. Os tempos de retenção foram 2,7 min para o padrão interno (sulpirida), 4,1 min para HOME, 11,6 minutos para OME e 12,6 min para OMES. A detecção dos analitos (UV a 302 nm) foi linear na faixa de 25 a 1000 ng mL-1. As recuperações absolutas variaram de 64,3 a 73,2% para todos os analitos. Um grupo de 38 voluntários sadios brasileiros foi fenotipado com esse método após a ingestão de uma dose oral única de 20 mg de omeprazol. O método apresentou precisão e exatidão adequadas, com limite de quantificação de 25 ng mL-1 para OME e seus metabólitos, o que permitiu a identificação de metabolizadores ultra-rápidos tanto para CYP2C19 quanto para CYP3A4, aproveitando as vantagens inerentes à identificação seletiva oferecida pelos detectores de arranjo de diodos.

A simple HPLC-DAD method using a reverse phase column and isocratic elution for the simultaneous determination of omeprazole (OME), 5-hydroxyomeprazole (HOME) and omeprazole sulphone (OMES) was developed. The proposed method was used to study CYP2C19 and CYP3A4 genetic polymorphisms using OME as the probe drug in a group of Brazilian volunteers. OME, HOME and OMES were extracted from plasma samples with Tris buffer pH 9.5 (0.2 mol L-1) and ethyl acetate. HPLC separation was achieved using a Shim-Pack RP-18e (150 <FONT FACE=Symbol>´</FONT> 4.6 mm i.d., 5 µm) column, with acetonitrile phosphate buffer pH 7.6 (24:76) as mobile phase and total run time of 15 min. Retention times were 2.7 min for internal standard (sulpiride), 4.1 min for HOME, 11.6 min for OME and 12.6 min for OMES. Detection (UV at 302 nm) of analytes was linear in the range from 25 to 1000 ng mL-1. Extraction recoveries were in the range of 64.3 to 73.2% for all analytes. A group of 38 Brazilian healthy volunteers was phenotyped with this method, after a single oral dose of 20 mg omeprazole. The method presented adequate accuracy and precision, with limit of quantification of 25 ng mL-1 for omeprazole and metabolites, which allowed the identification of ultra-rapid metabolizers for both CYP2C19 and CYP3A4 and took advantage of the selective identification offered by diode-array detectors.